换一批电化学发光免疫分析法在评价治疗性单抗与FcγRⅠ结合活性中的应用
Application of ECLI in evaluating the binding activity of therapeutic monoclonal antibody to FcγRⅠ
摘要目的:建立电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγR Ⅰ)结合活性的方法,并评价贝伐珠单抗生物类似药(similar biotherapeutic products,SBP)候选物和其原研药(reference biotherapeutic product,RBP)与FcγR Ⅰ结合活性的相似性.方法:先使用封闭液对链霉亲和素(streptavidin,SA)预包被的96孔MSD板进行封闭,再将生物素(biotin)标记的FcγR Ⅰ与之结合,之后加入不同稀释倍数的贝伐珠单抗,最后加入SULFO-TAG(Ru(bpy);+)标记的羊抗人检测抗体上机读数.按照试验设计分别对FcγR Ⅰ浓度、单抗样品初始浓度、倍比稀释倍数、检测抗体浓度等试验参数进行优化,并对优化后方法的准确性和精密性进行初步验证,还将建立的方法用于评价贝伐珠单抗SBP候选药和RBP与FcγR Ⅰ结合活性的相似性.结果:采用优化后的方法检测,贝伐珠单抗与FcγR Ⅰ的结合呈现良好的剂量效应曲线,R2＞0.99.该方法具有较好的准确性和精密性,靶值为50％～150％样品的回收率在95.2％～103.7％之间;RSD均小于10％.贝伐珠单抗SBP候选药与FcγR Ⅰ的相对结合活性均在为RBP相对结合活性均值±3SD之间.结论:电化学发光免疫分析法能够用于评价抗体与FcγR Ⅰ的结合活性,并可应用于对SBP候选药和RBP与FcγR Ⅰ结合活性的相似性分析.该方法的灵敏度和准确性较好,为评价抗体与FcγRⅠ的结合提供了新的技术手段.
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分类号
R917（药物分析）
栏目名称
DOI
10.16155/j.0254-1793.2019.01.05
发布时间
2019-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重大新药创制恶性肿瘤治疗的单抗类生物类似药质量评价研究（(2018ZX09736016-007)）
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