换一批摘要细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分,是受污染的注射剂、制剂辅料和医疗器械等引起热原反应的主要原因,故应进行严格控制.本研究评价了阴离子交换层析、超滤和纳滤三种方法对一种哺乳动物细胞表达的重组蛋白中内毒素的去除效果.该蛋白的等电点为5.4～6.2,相对分子质量约为150 000.采用鲎试剂法检测内毒素残留,并采用SEC-HPLC和紫外-可见分光光度法检测蛋白纯度及浓度.结果表明,阴离子交换层析对内毒素的去除效果不显著,30 000的超滤膜将目的蛋白及内毒素同时截留.而纳滤膜将该重组蛋白中的内毒素含量从初始的大于160 EU/mg降低至10 EU/mg以下,该膜对目的蛋白无截留作用,且不影响蛋白纯度.推测蛋白溶液中钙离子等的存在使内毒素聚合成了更大的分子,故可利用纳滤膜进行去除.纳滤法操作简单,无需进行样品调节,故无需进行后续纯化、换液等工作,是精制内毒素超标样品的优选方法.
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关键词
内毒素阴离子交换层析超滤纳滤重组蛋白去除回收率EndotoxinAnion exchange chromatographyUltrafiltrationNanofiltrationRecombinant proteinRemovalYield
分类号
Q51（蛋白质）
栏目名称
DOI
10.19526/j.cnki.1005-8915.20240103
发布时间
2024-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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