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黄连素调节GPX4干预非酒精性脂肪肝机制研究

Study on the Mechanism of Berberine Regulating GPX4 in Non-alcoholic Fatty Liver Disease

摘要探究黄连素对非酒精性脂肪肝的影响,并揭示其具体作用机制.构建非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型,将构建模型成功的小鼠随机分为模型组、黄连素低、高剂量治疗组、黄连素+GPX4敲除组,并设置空白组.采用全自动生化仪检测血清甘油三酯血脂(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST),油红O染色检测肝脏脂质沉积情况,苏木素-伊红(HE)染色检测肝脏组织病理学变化,DCFH-DA探针检测肝脏细胞内活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹检测小鼠肝脏组织内GPX4蛋白水平.使用HepG2细胞构建NAFLD细胞模型,将细胞分为对照组、黄连素处理组、黄连素+RSL-3处理组,ELISA检测细胞内丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;透射电镜检测细胞内超微结构变化,蛋白免疫印迹检测细胞内GPX4蛋白水平.与空白组相比,模型组小鼠血脂、肝功能相关指标异常升高,肝脏脂质大量沉积且出现明显病理学损伤,肝组织细胞内ROS水平显著升高,GPX4蛋白表达明显下调.与模型组相比,黄连素治疗组小鼠血脂、肝功能相关指标明显趋于正常,肝脏脂质沉积和病理学损伤明显减轻,肝组织细胞内ROS水平显著降低,GPX4蛋白表达明显上调,当GPX4被敲除时,黄连素的治疗作用也显著下降(P＜0.05).与对照组相比,黄连素处理组细胞内SOD水平明显升高,MDA和ROS水平明显降低,细胞内脂质空泡减少、线粒体损伤减轻,GPX4表达显著增多,当使用铁死亡诱导剂RSL-3共处理时,黄连素的治疗作用被显著抑制(P＜0.05).实验证明黄连素可减轻小鼠脂肪肝和肝脏脂质沉积,改善其肝功能,其机制可能与调控GPX4介导的铁死亡途径有关.