重组猪源胰蛋白酶原的构建、表达与活性分析

Cloning and Expression of Porcine-recombination Trypsinogen Gene and Its Activity Analysis

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摘要目的:构建、表达重组猪源胰蛋白酶原,并对其进行分离纯化和酶活性分析.方法:利用大肠埃希菌表达系统(pET-28a,宿主菌BL21 DE3)优化天然猪源胰蛋白酶原基因,经乳糖诱导表达重组胰蛋白酶原蛋白,采用阴离子交换色谱法分离纯化,以SDS-PAGE电泳鉴定目标蛋白,以紫外分光光度法检测重组蛋白的酶活力.结果:测序结果表明,重组猪源胰蛋白酶原基因工程菌构建成功,SDS-PAGE检测显示目的蛋白条带位置与标准猪源胰蛋白酶条带位置一致,且酶活力可达513.09 U·mg-1.结论:成功获得了重组猪源胰蛋白酶原,且酶活力较好,为进一步研究生产提供了基础.

作者冯雪婷 ^[1] 刘素丽 ^[2] 黄潇 ^[2] 王云康 ^[3] 龙军 ^[4] 金亮 ^[3] 曹荣月 ^[3] 学术成果认领

作者单位中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009;江苏未名生物医药有限公司,江苏常州213000 ^[1] 江苏未名生物医药有限公司,江苏常州213000 ^[2] 中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009 ^[3] 南京中医药大学生命科学与技术学院,江苏南京210046 ^[4]

关键词猪源胰蛋白酶原基因包涵体变性乳糖诱导稀释复性

主题词猪(Swine)胰蛋白酶原(Trypsinogen)基因(Genes)乳糖(Lactose)包涵体(Inclusion Bodies)

分类号 Q556+.3

栏目名称

药学研究

发布时间 2015-03-17