摘要胞红蛋白(cytoglobin,Cygb)过表达己被证实能减少细胞外基质沉积促进肝纤维化恢复,但其机制尚未明确.本研究构建表达细胞穿膜肽TAT与Cygb的融合蛋白(TAT-Cygb),探究其调控活化型肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)铁死亡作用.体外培养肝星状细胞系LX2,分别给予不同浓度的TAT-Cygb及铁死亡诱导剂(erastin)处理,台盼蓝染色、透射电镜、普鲁士蓝染色、试剂盒检测等考察TAT-Cygb对铁死亡表型包括细胞活力、细胞形态特征、铁离子含量、脂质过氧化产物水平及抗氧化系统指标的影响;同时采用铁死亡抑制剂(ferrostain-1,Fer-1)进行反向验证,给予TAT-Cygb和Fer-1共同处理,试剂盒法测定Fe2+、活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平,蛋白印迹法检测HSCs活化指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、纤连蛋白(fibronectin)的表达水平,免疫荧光观察促纤维化关键指标表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、肌间线蛋白(desmin)的表达情况.结果显示,TAT-Cygb能显著降低LX2细胞活力,并触发了细胞铁死亡相关事件,包括促进胞内Fe2+堆积并诱导线粒体形态改变,加剧脂质过氧化产物堆积,降低抗氧化指标水平,与erastin发挥相似的作用;而Fer-1显著削弱了 TAT-Cygb诱导的Fe2+、ROS、MD A、4-HNE水平的升高以及NADPH和GSH水平的降低,同时还减轻了TAT-Cygb诱导高表达的α-SMA、collagenⅠ和fibronectin水平,下调了TAT-Cygb对EGFR、desmin的表达抑制作用.这一细胞水平研究表明,TAT-Cygb能诱发活化型HSCs铁死亡事件.本研究揭示了 TAT-Cygb抗肝纤维化潜在的作用机制,为深入研究TAT-Cygb通过调控铁死亡途径发挥其生物学功能的分子机制提供实验依据.