换一批人单纯疱疹病毒加强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及表达
Construction and characterization of the recombinant expressive vector of human simplex virus 2-enhanced green fluorescent protein
摘要目的:构建人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)加强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达系统,用于HSV感染的快速诊断. 方法:通过PCR扩增HSV-2启动子 ICP10目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1,构建重组质粒pICP10-EGFP,脂质体法转染Vero细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株Vero-ICP10-EGFP.以不同量的HSV-2感染Vero-ICP10-EGFP细胞,分别于感染后6、8和10 h,于倒置荧光显微镜下检测EGFP荧光.同时以人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP10-EGFP细胞,检测其特异性. 结果:构建的重组质粒pICP10-EGFP经DNA测序鉴定,表明重组正确.重组质粒pICP10-EGFP转染Vero细胞后,经G418长期筛选建立稳定转染细胞株Vero-ICP10-EGFP,感染HSV-2后6 h,倒置荧光显微镜下即可检测到EGFP荧光.人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP10-EGFP细胞后6、10和24 h,均未检测到特异性荧光. 结论:成功构建了HSV-EGFP真核表达系统,其具有早期、快速、灵敏等优点,特异性较高,可望用于HSV感染的快速诊断.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-8199.2006.07.003
发布时间
2006-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（2005BS02001）
- 浏览207
- 被引9
- 下载5
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
