换一批
换一批2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶重组蛋白的制备及鉴定
Preparation and identification of serine/threonine phosphotase in Streptococcus suis serotype 2
摘要目的 链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(serine/threonine phosphotase,STP)是重要的磷酸化信号调控系统成员之一.文中对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)STP编码基因stp进行原核表达并对纯化蛋白进行酶活测定.方法对S.suis 2 stp进行生物信息学分析,PCR扩增stp基因片段,构建重组表达载体pET28a::stp.将载体转入E.coli BL21中,经IPTG诱导,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用磷酸对硝基苯酯(p-nitrophenyl phosphate,pNPP)为底物测定其水解量进而鉴定磷酸酶活性.结果 从05ZYH33基因组中PCR扩增到810bp的片段,经连接获得重组表达载体pET28a::stp;经诱导表达及纯化获得相对分子质量为32000的重组蛋白,该蛋白在Mn2+存在下能够水解pNpp.结论获得纯度较高的STP重组蛋白,该蛋白具有Mn2+依赖的磷酸酶活性,为后续阐明STK/STP磷酸化系统的调控机制打下基础.
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关键词
2型猪链球菌链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶原核表达酶活鉴定Streptococcus suis serotype 2Serine/threonine phosphotaseProkaryotic expressionPhosphatase assays
主题词
丝氨酸(Serine)猪链球菌(Streptococcus suis)磷酸苏氨酸(Phosphothreonine)蛋白(Egg White)氢离子浓度(Hydrogen-Ion Concentration)
分类号
Q784
栏目名称
基础研究
发布时间
2014-04-16
基金项目
国家自然科学基金
江苏省自然科学基金
南京军区医学科技创新课题
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