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血清中胎盘来源外泌体的分离与鉴定

Isolation and identification of placental exosomes from maternal serum

二维码有效期 120s

摘要目的：妊娠期间，胎盘可释放外泌体到母体循环，在正常妊娠或胎盘相关妊娠并发症中发挥重要作用。文中旨在建立简便、高效、低耗的母血清胎盘来源外泌体的分离纯化方法，为妊娠疾病研究奠定基础。方法蔗糖梯度离心联合2次8％PEG6000沉淀，分离纯化正常孕妇血清中胎盘来源外泌体，Western blot检测胎盘来源外泌体标记蛋白分子（ CD63、CD81、PLAP），银染法分析各密度层中所有蛋白质条带，透射电镜鉴定胎盘来源外泌体形态，动态光散射测定外泌体粒径及分布。结果通过蔗糖密度梯度离心后得到的各分层液经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见， Western blot结果显示CD63、CD81和PLAP同时表达于21％～34％蔗糖密度层，证明血清胎盘外泌体主要存在于1．09～1．16 g／mL蔗糖密度层。透射电镜鉴定获得的胎盘来源外泌体形态符合一般外泌体特征，且特异表达PLAP。动态光散射测定获得的胎盘外泌体直径分布于28～91 nm，且大小均一。结论成功建立了一种简便、快捷、高效分离血清中胎盘来源外泌体的改良方法，为研究胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘相关并发症中的作用奠定实验基础。