miR-375靶向调控人矮小同源盒基因2基因在人食管鳞状细胞癌中的表达
Targeted regulation of SHOX2 gene expression by miR-375 in human esophageal squamous cancer cells
摘要目的 miR-375在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)中低表达,但其调控的下游靶基因仍不明确. 文中初步探讨miR-375在调控人食管鳞癌细胞中人矮小同源盒基因2(short stature homobox 2, SHOX2)的表达中的作用. 方法 运用生物信息学预测软件TargetScan、miRanda、PicTar、miRTarget2和PITA预测miR-375在SHOX2基因可能的作用位点. 构建野生型SHOX2 3′UTR报告基因载体(pSHOX2-375-WT)及突变型SHOX2 3′UTR报告基因载体(pSHOX2-375-mut),测序鉴定. 分7组转染:pmiR 组、pSHOX2-375-WT 组、pSHOX2-375-WT +miR-375 组、pSHOX2-375-WT +miR-NC 组、pSHOX2-375-mut 组、pSHOX2-375-mut+miR-375组、pSHOX2-375-mut+miR-NC组,分别检测荧光素酶活性. 转染miR-375的mimics于食管鳞癌细胞中,SHOX2 mRNA及蛋白表达分析. 另检测食管鳞癌组织术后标本miR-375及SHOX2表达. 结果 TargetScan、miRan-da、PicTar、MirTarget2和PITA软件预测结果显示miR-375 在SHOX2 3′UTR 1156-1170 bp区域有且仅有1个保守作用位点.pSHOX2-375-WT+miR-375组荧光素酶活性(0.261 ±0.036)显著低于[pmiR(1.818 ±0.061)、pSHOX2-375-WT组(1.820 ± 0.086)、pSHOX2-375-WT+miR-NC组(1.851 ±0.094)、pSHOX2-375-mut组(1.861 ±0.059)、pSHOX2-375-mut +miR-375 组(1.896 ±0.048)、pSHOX2-375-mut +miR-NC组(1.760 ±0.062)],差异均有统计学意义(P<0.01). 过表达 miR-375 后EC9706细胞SHOX2 mRNA及蛋白较对照组相比表达受到抑制. 食管鳞癌组织中的miR-375较癌旁组织表达降低,而SHOX2表达较癌旁组织表达增强. 结论 miR-375在食管鳞癌细胞EC9706中靶向调控SHOX2基因的表达.
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