胃癌 MKN-45细胞系的无血清培养技术及干细胞的制备

Serum-free culture of the MKN-45 gastric cancer cell line and preparation of stem cells

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摘要目的：胃癌干细胞的制备困难一直是阻碍胃癌研究进展的主要因素。文中研究无血清培养基悬浮培养胃癌MKN-45细胞系技术，并根据胃癌干细胞（cancer stem cells，CSCs）的生物学标记筛选出该细胞系中的干细胞。方法 MKN-45细胞系在无血清培养基中培养8周后，取对数生长期的MKN-45细胞以Hoechst33342孵育后流式细胞仪（ FACS）检测侧群细胞。当侧群细胞达约25％时，收集全部细胞微球体，加荧光标记的CD133和CD44单抗孵育后 FACS 筛选，选CDl33＋CD44＋细胞即为胃癌干细胞。结果胃癌MKN-45细胞系中约40％的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖并形成自由飘浮的细胞球。双苯酰胺33342染色检测提示MKN-45细胞中侧群细胞含量为3．4％，而细胞球中侧群细胞细胞含量则明显增高，可达到26．9％；收集的侧群细胞通过FACS检测表面标记，MKN-45细胞CDl33＋CD44＋细胞含量为11．2％，而细胞球中CD133＋CD44＋细胞含量为90．3％。结论应用无血清培养基悬浮培养法能成功获得CSCs富集的肿瘤球，Hoechst33342及表面标记双重检测提取法可筛选出其中的CSCs，并可作为今后胃癌干细胞研究的实验基础。