RNA干扰GCF2基因沉默对人肝癌BEL-7404细胞周期的影响

Effect of RNA-mediated GCF2 silencing on the cell cycle of human hepatocellular carcinoma cell line BEL-7404

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摘要目的 GC结合因子2(GCF2)是一种转录抑制因子,通过特异性结合富含GC序列的基因启动子而抑制该基因转录.文中通过靶向沉默GCF2基因表达观察GCF2对人肝癌细胞BEL-7404细胞周期的影响.方法将细胞分为空白对照组、阴性对照组及GCF2-siRNA组.空白对照组不转染任何序列,阴性对照组转染阴性对照序列,GCF2-siRNA组转染靶向GCF2基因的GCF2-siRNA序列以沉默GCF2在肝癌BEL-7404细胞中的表达.CCK-8法和流式细胞术分别检测沉默GCF2对细胞增殖和周期的影响,Western blot检测细胞周期蛋白cyclinD1及cyclinE、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2及Cdk4蛋白表达.结果 GCF2下调后,GCF2-siRNA组细胞增殖在转染24、48、72和96 h受到不同程度抑制,抑制率分别为27.3%,43.6%,33.5%和29.7%,以转染48 h抑制率最高.与GCF2-siRNA组G1期百分比[(61.50±0.47)%]比较,空白对照组、阴性对照组[(45.50±0.75)%、(47.30±2.44)%]均下降(P<0.05);与GCF2-siRNA组S期百分比[(21.30±1.23)%]比较,空白对照组、阴性对照组[(37.00±1.80)%、(34.50±1.86)%]均升高(P<0.05).转染48 h后,GCF2-siRNA组cyclinE和Cdk2蛋白相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论下调GCF2表达引起BEL-7404细胞周期阻滞,提示GCF2对肝癌细胞周期影响可能是其参与肝癌发生发展的重要途径.