换一批小鼠肺组织羟脯氨酸含量测定的实验方法优化
Optimized experimental method for determination of hydroxyproline in lung tissue of mice
摘要目的 羟脯氨酸(HYP)的检测手段众多,但鲜有精确适用于小鼠肺组织的方法.文章拟建立一种准确、可靠的基于小鼠肺组织的HYP水平测定方法,以更为有效地评估其纤维化发展程度.方法 以碱水解法为基础,比较碱水解液浓度及水解时间对小鼠肺组织HYP水平测定结果的影响;比较实验相关条件改变对HYP标准品测定结果的影响;以上述实验结果为基础,比较干燥和湿润的小鼠肺组织HYP水平测定结果.结果 通过优化得出,碱水解液最佳浓度为2 mol/L,最佳水解时间为20 min;柠檬酸缓冲液最适pH值为6.0～6.5,适用于氯胺T最佳溶剂为甲醇,氯胺T溶液的最佳反应时间为15 min,高氯酸溶液的最佳反应时间为5 min,4-(二甲氨基)苯甲醛溶液的最佳显色条件为85℃水浴3 min,用干燥肺组织测得的HYP含量[(212.26±8.83)mg/g肺组织]较用湿润肺组织[(162.70±15.04)mg/g肺组织]高(P<0.01).用改进后方案测得的肺组织HYP水平([(375.20±6.83)mg/g肺组织])明显高于使用优化前[(345.99±8.57)mg/g肺组织].以HYP标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为y=0.014x+0.0725,相关系数为R2=0.9991.回收率分别为118.68％、117.38％和117.88％,均在80％～120％之间,说明本法较为可靠.结论 建立了一种准确、可靠的基于小鼠肺组织的HYP水平测定方法.
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分类号
R563（呼吸系及胸部疾病）
栏目名称
DOI
10.16571/j.cnki.1008-8199.2020.03.016
发布时间
2020-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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