换一批同源重组法衣原体RNA聚合酶表达载体的构建和应用
Construction and application of chlamydia RNA polymerase expression vector by using homologous recom-bination method
摘要目的 利用同源重组法构建衣原体RNA聚合酶(cRNAP)各亚基质粒,转化入大肠埃希菌中表达蛋白并探讨其在衣原体转录调控中的应用.方法 根据GenBank中的基因序列设计特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增cRNAP各亚基的目的基因片段,对PCR产物进行纯化,质粒载体进行质粒抽提、质粒酶切、胶回收等处理.采用同源重组法将基因片段插入到目的载体进行片段融合构建cRNAP各亚基表达质粒,融合产物转化后用特异性引物进行PCR验证和测序.构建好的融合产物转化入大肠埃希菌化学感受态细胞表达蛋白.结果 成功构建cRNAP各亚基质粒并成功表达cRNAP各亚基蛋白,研究了衣原体转录调节因子GrgA与cRNAP的直接相互作用是GrgA与cRNAP的α、β'亚基有结合,与β亚基无结合.两者可以作为衣原体感染治疗和预防的药物作用新靶点.结论 同源重组法可用于构建cRNAP各亚基质粒并成功表达相应蛋白,并用于研究转录调节因子GrgA与cRNAP各亚基蛋白的结合位点,为衣原体感染治疗和预防药物作用新靶点的研究提供参考信息.
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关键词
同源重组法衣原体cRNAP亚基质粒载体融合蛋白homologous recombination methodchlamydiacRNAPsubunitplasmid vectorfusion protein
分类号
R374
栏目名称
DOI
10.16571/j.cnki.2097-2768.2025.02.001
发布时间
2025-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31370209）；
南通市卫生健康委员会面上指令课题（MS2022064）
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