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miRNA-135a-5p对蛋白激酶Cα的调控作用及对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

To investigate the regulation of miRNA-135a-5p on protein kinase Cα and its effect on the proliferation and apoptosis of human ovarian granulosa cells

摘要目的 探讨miRNA-135a-5p对蛋白激酶Cα(PRKCA)的调控作用及对人卵巢颗粒细胞生物学行为的影响.方法 收集 2023 年 8 月至 2023 年 12 月于邢台市人民医院收治的 30 例多囊卵巢综合征患者以及同期于妇科检查的 30 例健康者的外周血标本.实时定量PCR检测miRNA-135a-5p、PRKCA mRNA表达水平,Pearson相关分析患者miRNA-135a-5p及PRKCA mRNA表达水平相关性.采用荧光素酶报告系统确定 miRNA-135a-5p对 PRKCA的调控作用.将人卵巢颗粒细胞KGN分为对照组(未做任何处理)、miR-NC组(转染空白质粒)、miRNA-135a-5p低表达组(转染 miRNA-135a-5p inhibitor)、miRNA-135a-5p过表达组(转染 miRNA-135a-5p mimic).分析 miRNA-135a-5p 对细胞增殖能力、凋亡情况的影响,并检测PRKCA以及NF-κB信号通路蛋白表达情况.结果 与健康者比较,多囊卵巢综合征患者外周血中miRNA-135a-5p表达水平升高,PRKCA mRNA表达水平降低(P<0.05).患者外周血中PRKCA mRNA与miRNA-135a-5p表达水平呈负相关性(r=-0.655,P<0.05).荧光素酶实验表明 miRNA-135a-5p可靶向PRKCA.与对照组、miR-NC组比较,miRNA-135a-5p过表达组2~4 d的细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率升高,PRKCA mRNA及蛋白表达降低,NF-κB信号通路蛋白(NF-κB、P-p38/p38、TNF-α、IL-6)表达升高,而miRNA-135a-5p低表达组增殖倍数增加,细胞凋亡率降低,PRKCA mRNA及蛋白表达升高,NF-κB信号通路蛋白表达降低(P<0.05).结论 多囊卵巢综合征患者血清miRNA-135a-5p处于高表达状态,miRNA-135a-5p通过靶向调控PRKCA,激活NF-κB信号通路,从而诱导人卵巢颗粒细胞炎性介质释放,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.

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