换一批
换一批MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建
Construction of an Inducible Transformation Model Consisting of Nontransformed MCF-10A Containing Er-Src
摘要目的 构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型.方法 利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒.包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系.利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化.结果 构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白.TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化.结论 成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型.
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关键词
人乳腺表皮细胞雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白他莫西芬细胞转化Human mammary epithelial cells(MCF10A)ER-SrcTamoxifenCell transformation
分类号
R393
栏目名称
论著
发布时间
2014-11-28
基金项目
国家自然科学基金面上项目
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