换一批
换一批新基因FAM92A1-289与增殖细胞核抗原PCNA相互作用的验证
Indentfication of Interaction Between New Gene FAM92A1-289 and Proliferating Cell Nuclear Antigen PCNA
摘要目的 利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白FAM92A1-289和PCNA(增殖细胞核抗原)之间的相互作用.方法 构建带有嘌呤霉素抗性的载体CMV-SP6--GFP-FAM92A1-289和真核表达载体PCDNA3.1-PCNA,先将CMV-SP6-GFP-FAM92A1-289载体转染入Hela细胞,通过最合适浓度的嘌呤霉素筛选,得到稳定表达FAM92A1-289的Hela/FAM92A1-289细胞,再将载体PCDNA3.1-PCNA转染入Hela/ FAM92A1-289细胞,利用免疫共沉淀来验证FAM92A1-289和PCNA之间的相互作用.结果 构建的重组表达载体经双酶切、测序鉴定正确,稳定表达株Hela/ FAM92A1-289细胞构建成功,PCNA单克隆抗体沉淀蛋白复合物后,用GFP抗体进行Western blot法检测,检测出了GFP-FAM92A1-289蛋白.结论 免疫共沉淀证明了FAM92A1-289和PCNA之间存在相互作用.
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栏目名称
论著
DOI
10.11969/j.issn.1673-548X.2016.03.014
发布时间
2016-07-27
基金项目
湖北省自然科学基金资助项目
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