换一批
换一批Hcmv-miR-UL112荧光定量RT-PCR检测方法的建立
Development of a Fluorescent Quantitative RT-PCR assay for Hcmv-miR-UL112
摘要目的 建立一种能快速准确检测hcmv-miR-UL112的方法.方法 根据miRBase网站中公布的hcmv-miR-UL112基因序列,通过设计引物、探针及优化反应条件,建立了一种实时荧光定量PCR方法对hcmv-miR-UL112进行定量检测,并进行敏感度、重复性和特异性实验,同时对PCR产物进行测序验证.结果 获得了1条特异性茎环反转录引物,一条特异性PCR正向引物和通用反向引物.PCR最佳反应条件为95℃ 10min,53℃2min;95℃ 15s,57℃ 40s,共40个循环.该方法的批内变异系数CV和批间CV均＜5％,相关系数R2均＞0.99,扩增效率均＞90.0％.结论 成功建立了一种敏感度高、特异性强、重复性好并且简便快速的hcmv-miR-UL112荧光定量qRT-PCR检测方法.
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DOI
10.11969/j.issn.1673-548X.2016.04.015
发布时间
2016-08-08
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