换一批
换一批K-ras第12密码子突变对K-ras蛋白自身活性及下游信号通路的影响
Effects of K-ras Codon 12 Mutation on the Activity of K-ras Protein and Its Down Stream Signal Pathway
摘要目的 探讨K-ras第12密码子突变对K-ras蛋白自身活性及其下游信号通路的影响.方法 选用本室已构建好的稳定高表达WT、G12A、G12C、G12D、G12R、G12S和G12V型K-ras蛋白的cos7同源细胞株作为研究对象,通过GST-Raf-1 Ras结合域特异性结合Ras-GTP空间构象,免疫沉淀细胞内具有活性的K-ras蛋白,利用Western blot技术检测沉淀下来的Ras-GTP水平并进行比较分析;通过Western blot法检测K-ras下游信号通路中MER、ERK、ATK蛋白分子的磷酸化水平.结果 饥饿处理后表达野生型K-ras蛋白的cos7同源细胞株内RAS-GTP水平较低,而表达G12A、G12C、G12D、G12R、G12S和G12V型K-ras蛋白的cos7同源细胞株内RAS-GTP水平活性为WT型K-ras蛋白3.5～40倍不等;表达K-ras突变蛋白的cos7同源细胞株内MEK、ERK和AKT的磷酸化水平比表达野生型K-ras蛋白的cos7同源细胞高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 K-ras第12密码子突变导致K-ras蛋白自身永久活化,且不需要外源性生长因子的刺激;突变K-ras可以持续激活K-ras蛋白下游效应因子,使K-ras信号通路持久活化.
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