换一批
换一批柯萨奇病毒B组5型TaqMan一步法RT-qPCR检测方法的建立
Establishment of TaqMan One-step Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction Assay to Detect Coxsackievirus B5
摘要目的 建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)特异的TaqMan 一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法.方法 根据 CV-B5 的 VP1 序列,设计特异性引物和TaqMan探针.将目的基因插入pMD18TM载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价.结果 该方法在103～1011拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r2＞0.99),扩增效率E=100.9％,敏感度达1 × 103拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好.结论 本实验建立的TaqMan 一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析.
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关键词
柯萨奇病毒B组5型实时荧光定量聚合酶链反应TaqMan探针法Coxsackievirus B5Real-time quantitative polymerase chain reactionTaqMan probe method
分类号
R373.9
栏目名称
DOI
10.11969/j.issn.1673-548X.2024.07.017
发布时间
2024-09-05
基金项目
云南省科技计划项目（202202AA100016）
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