摘要目的 探究低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α(HIF-1α)和2α(HIF-2α)对乙醇诱导的结肠腺癌细胞(colorectal adenocarcinoma cell,Caco-2)单层膜肠上皮屏障功能损伤的作用及机制.方法 利用Caco-2细胞建立单层膜肠上皮细胞屏障模型,用不同浓度乙醇处理,MTT法检测细胞的增殖活性.选取合适的乙醇作用浓度和时间刺激Caco-2细胞,ELISA 检测炎性细胞因子白介素-1β(interleukin 1β,IL-1 β)和白介素-6(interleukin 6,IL-6)水平,W estern blot 法和 RT-PCR检测HIF-1 α、HIF-2α、人质膜型唾液酸酶(Neu3)蛋白及mRNA的表达,采用跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)评估细胞单层膜的通透性.转染小分子干扰RN A(small interfering RNA,siRNA)敲低HIF-1 α、HIF-2α水平后,乙醇处理Caco-2细胞,检测细胞的增殖活性、炎性因子水平、TEER数值和Neu3的表达.最后,敲低Neu3的表达,乙醇处理细胞,检测细胞单层膜的TEER.结果 当乙醇浓度＞5％时,对Caco-2细胞增殖活性的抑制呈现浓度依赖性.用5％浓度的乙醇刺激Caco-2细胞1h,与对照组比较,发现其炎性细胞因子IL-1β和IL-6的分泌增加,HIF-1α、HIF-2α、Neu3的表达升高,TEER水平下降(P＜0.05).分别敲低Caco-2细胞的HIF-1α和HIF-2α表达后,与阴性序列对照组比较,其细胞增殖活性减弱,均促进了 IL-1β和IL-6的分泌,两者TEER数值也进一步降低(P＜0.05).并且,敲低HIF-2α抑制了细胞中Neu3的表达(P＜0.05).最后,敲低Neu3使乙醇诱导的细胞单层膜TEER值下降(P＜0.05).结论 一定浓度和时间的乙醇暴露可引起肠上皮细胞增殖活性减弱和炎性细胞因子释放,使肠上皮细胞屏障功能受损,HIF-1α和HIF-2α参与了该过程的调节.敲低HIF-1α或HIF-2α可进一步加重乙醇诱导的肠上皮细胞屏障功能的损伤,具体机制可能是肠上皮细胞中HIF-2α,而不是HIF-1α通过调控Neu3来实现.