Cx43在模拟失重致血管平滑肌细胞表型转换中的作用
Effects of Cx43 on phenotypic switching of vascular smooth muscle cells under simulated microgravity
摘要目的 探究缝隙连接蛋白43(Cx43)在模拟失重致血管平滑肌细胞表型转换中的作用.方法 采用细胞应力加载培养系统模拟失重效应,将培养的人动脉平滑肌细胞(HASMCs)随机分为正常重力组(NC组)与模拟失重组(SMG组).持续循环拉伸 96h 后,质谱筛选差异蛋白;通过 Western blotting 测定 HASMCs 中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌蛋白 22-α(SM22α)、骨桥蛋白(OPN)及 Cx43 的表达情况,结合Transwell迁移实验评估其迁移能力;利用shRNA慢病毒载体构建Cx43 敲低细胞并循环拉伸 96h后验证其功能.结果 蛋白组学结果显示,与NC组相比,SMG组收缩表型相关蛋白ACTA2、TAGLN出现显著性下调,迁移相关蛋白LPAR1、TGFBR1、PDGFD、GJA1 出现显著性上升,且在细胞迁移正调控和细胞因子相互作用等方面显著富集.进一步实验结果显示,与 NC 组相比,SMG 组 HASMCs 中 α-SMA 和 SM22α 水平明显下降(P<0.05),OPN表达显著升高(P<0.05),且迁移细胞数量显著增加(P<0.05).SMG组HASMCs中Cx43 的mRNA和蛋白水平相较于NC组明显升高(P<0.05).敲低Cx43 使SMG组的α-SMA、SM22α蛋白表达显著上升(P<0.05),OPN蛋白表达显著下降(P<0.05);Transwell实验结果表明,敲低Cx43 可抑制HASMCs迁移能力.结论 模拟失重效应通过Cx43 通路促进平滑肌细胞的表型转换,并促进其迁移能力.
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