重叠PCR克隆Exendin-4的基因及序列分析

Clone of Exendin-4 cDNA gene by overlap extension PCR and its sequence analysis

二维码有效期 120s

摘要目的克隆Exendin-4 39肽氨基酸序列基因编码区cDNA.方法根据Exendin-4氨基酸序列编码cDNA,设计正、负向引物/模板链,利用重叠延伸PCR法扩增出Exendin-4编码区基因DNA片段；将获得的基因片段插入pGEM-T-Easy质粒中；转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶及核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒.结果经质粒DNA酶切分析及序列测定,获得了Exendin-4 DNA片段序列.结论本研究成功克隆了Exendin--4 cDNA,为下一步构建Exendin-4真核表达载体打下基础,也为Exendin-4基因治疗糖尿病提供了前提条件.

作者王俊红 ^[1] 郭永红 ^[2] 张静 ^[3] 徐静 ^[3] 谢璇 ^[3] 杨广笑 ^[4] 王全颖 ^[4] 王枫 ^[5] 学术成果认领

作者单位西安交通大学医学院第二附属医院内分泌科,陕西西安710004;第四军医大学营养与食品卫生教研室,陕西西安710032 ^[1] 西安交通大学医学院第二附属医院感染科,陕西西安,710004 ^[2] 西安交通大学医学院第二附属医院内分泌科,陕西西安,710004 ^[3] 西安华广生物工程有限公司,陕西西安,710025 ^[4] 第四军医大学营养与食品卫生教研室,陕西西安,710032 ^[5]

关键词 Exendin-4 重叠延伸PCR 基因克隆 Exendin-4 Overlap extension PCR Gene clone

主题词基因(Genes)序列分析(Sequence Analysis)质粒(Plasmids)氨基酸序列(Amino Acid Sequence)目的(Goals)

分类号 Q78

栏目名称论著

DOI 10.3969/j.issn.1673-7210.2013.15.005

发布时间 2013-08-20

基金项目

陕西省科学技术研究发展计划项目