黄连水提物对人皮肤肿瘤A431细胞凋亡、增殖的影响

Effects of water extract of berberine on apoptosis and proliferation of human skin tumor A431 cells

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摘要目的探讨黄连水提物对人皮肤肿瘤A431细胞凋亡、增殖的影响.方法采用低温提取工艺,从药材中提取出水溶性的小分子混合物,用紫外色谱分析仪检测混合物成分;采用MTT法检测药物对人皮肤肿瘤A431细胞的抑制作用,药物设4个浓度,即6.3、12.5、25、50 μg/μL,并将其作为药物组,未加药物的为对照组,观察24、48、72 h抑瘤率;然后用Tunel检测细胞凋亡现象;通过MTT筛选后,用25 μg/μL黄连水提物作用肿瘤A431细胞48 h后,用Western blot检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2凋亡途径的影响.结果紫外光谱分析黄连水提物主要成分为核酸、生物碱等,MTT显示25 μg/μL黄连水提取物在48 h对A431细胞的抑制率已达到最佳(P＜0.05).显微镜下,对照组无变化.25 μg/μL黄连水提物孵育48 h后,细胞明显的数量减少、变圆、漂浮;Tunel显示25 μg/μL黄连水提物核定位处绿光明显增多,提示细胞大量凋亡.本研究检测显示,25 μg/μL黄连水提取物孵育48 h后,肿瘤A-431细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达量显著升高,而Bcl-2的表达量显著降低.结论本研究初步表明黄连水提小分子混合物可促进A-431细胞凋亡,抑制细胞增殖.其机制包括细胞外凋亡通路和细胞内凋亡通路,导致肿瘤细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9上调及抑制凋亡蛋白Bcl-2的下调.这进一步明确了黄连水提物在治疗皮肤肿瘤中的作用机制,为皮肤肿瘤的治疗提供的方法.