基于JAK3-STAT5信号通路探讨柚皮素对Jurkat T细胞免疫功能的影响
Investigation of the effect of naringin on the immune function of Jurkat T cells based on the JAK3-STAT5 signalling pathway
摘要目的 探讨柚皮素对Jurkat T细胞免疫功能的影响及其基于JAK3-STAT5信号通路的作用机制.方法 以Jurkat T细胞为研究对象.采用CCK8法检测细胞增殖率[对照组、柚皮素低浓度组(50 μmol/L)、柚皮素中浓度组(100 μmol/L)和柚皮素高浓度组(200 μmol/L)];流式细胞术分析白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)分泌及外泌体膜表面细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序性死亡受体1(PD-1)表达[激动剂组(PHA 10 μg)、抑制剂组(BD750 1 μmol/L)、对照组、柚皮素低浓度组(50 μmol/L)、柚皮素中浓度组(100 μmol/L)];RT-qPCR检测Cyclin-D1、Bcl-2 mRNA水平[对照组、柚皮素低浓度组(50 μmol/L)、柚皮素中浓度组(100 μmol/L)];Western blot法检测JAK3、STAT5磷酸化及下游蛋白表达水平[激动剂组(PHA 10 μg)、抑制剂组(BD750 1 μmol/L)、对照组、柚皮素低浓度组(50 μmol/L)、柚皮素中浓度组(100 μmol/L)].结果 与对照组比较,柚皮素低、中浓度组中细胞增殖率升高(P<0.05),而柚皮素高浓度组细胞增殖率降低(P<0.05).与对照组比较,柚皮素低浓度组、柚皮素中浓度组、激动剂组IL-2和IFN-γ分泌水平升高,抑制剂组IL-2和IFN-γ分泌水平降低(P<0.05).与对照组比较,柚皮素低浓度组外泌体CTLA-4表达量降低,柚皮素中浓度组、激动剂组外泌体CTLA-4和PD-1表达量降低,抑制剂组外泌体CTLA-4和PD-1表达量升高(P<0.05).与对照组比较,柚皮素低、中浓度组Cyclin-D1 mRNA表达量升高,柚皮素中浓度组Bcl-2 mRNA表达量升高(P<0.05).与对照组比较,柚皮素低浓度组、柚皮素中浓度组、激动剂组JAK3和STAT5磷酸化水平、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达升高,抑制剂组JAK3和STAT5磷酸化水平、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).结论 柚皮素对Jurkat T细胞功能具有双向调节作用:低浓度促进增殖及细胞因子分泌,高浓度抑制增殖;其机制可能与抑制免疫检查点分子表达、激活JAK3-STAT5信号通路及调控增殖相关基因表达有关,柚皮素可能作为T细胞免疫调节的潜在候选分子.
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