基于ITS2序列的苗药金果榄及其混伪品分子鉴定
Molecular identification of Miao ethnicity medicine Tinosporae Radix and its mixed counterfeits based on ITS2 sequence
摘要目的 利用DNA条形码技术对苗药金果榄原植物青牛胆及其混伪品进行分子鉴定研究,评价ITS2序列鉴定金果榄的能力.方法 采用试剂盒法提取青牛胆及其近缘品种、易混品种的总DNA,PCR扩增其ITS2序列并进行双向测序,利用CodonCode Aligner软件拼接,Clustal X 2.1对序列进行多重比对,GeneDoc中生成多重序列比对图,利用MEGA 11计算并分析种内和种间遗传变异及构建系统发育树.结果 共分析出9个物种42条ITS2序列(实验获取序列青牛胆5条、易混品种4条,另从NCBI下载相关序列33条),PCR实验获取序列扩增和测序成功率均为100%,引物通用性较好;青牛胆与该属其他植物序列之间存在部分的插入、缺失、转换和颠换现象;最大种内遗传距离0.040 0远远小于最小种间遗传距离0.282 6;Barcoding gap图中表明种间、种内遗传距离无重叠,具有明显的Barcoding gap存在.构建的NJ系统发育树中能有效将青牛胆与研究中其他物种聚类区分开.结论 ITS2序列可作为鉴别金果榄及其混伪品的有效辅助手段.
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