换一批基于实验设计的报告基因法检测甘精胰岛素生物活性方法的建立及验证
Establishment and Validation of a Reporter Gene Assay for Determining the Biological Activity of Insulin Glargine Based on Design of Experiments
摘要目的 建立基于实验设计(DOE)理念优化的报告基因法用于甘精胰岛素生物活性测定,并进行全面方法学验证.方法 利用稳定转染胰岛素受体基因、STAT5b 响应元件和荧光素酶报告基因的 HEK293 细胞(HEK293/IRL-Luc),通过响应曲面设计优化关键参数(细胞密度、药物稀释倍数、药物作用时间);依据 ICH Q2(R2)和《中华人民共和国药典》2020 年版通则进行专属性、精密度、准确度、线性及重复性验证.结果 最佳实验条件为:细胞密度每毫升(1.4～4.6)×105个、药物作用时间16 h、药物采用 2 倍系列稀释(起始浓度600 nmol?L-1).方法学验证结果表明,该生物活性测定方法专属性良好;重复性几何变异系数(GCV)≤10%,中间精密度 GCV<12%;相对偏倚及置信区间的绝对值均不超过 12%(64%～156%效价水平范围);线性范围的相关系数 R2 ＝ 0.9908.结论 该研究建立的基于 DOE 优化的报告基因法操作简便、结果准确,可提升检测通量和可重复性,与小鼠血糖法具有良好的一致性,为重组人胰岛素质量控制提供了符合"3R"原则的体外替代方法.
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分类号
R95（药事组织）
栏目名称
DOI
10.3870/j.issn.1004-0781.2026.04.020
发布时间
2026-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北省技术创新计划资助项目（2023BCB097）
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