换一批
换一批红花转录因子CtMYB1基因的克隆及原核表达
Cloning and prokaryotic expression of transcription factor CtMYB1 gene in Carthamus tinctorius
摘要目的 从红花Carthamus tinctorius花瓣中克隆转录因子基因CtMYB1,并进行序列分析和原核表达载体的构建.方法 根据红花转录组测序结果中得到的高表达的Unigene123933序列,利用RT-PCR和RACE技术从红花花瓣中扩增得到CtMYB1基因的全长eDNA序列,并进行生物信息学分析;以CtMYB1基因的全长cDNA序列为模板,PCR扩增得到CtMYB1基因的开放阅读框(ORF)序列,构建原核表达载体pEASY-E1-CtMYB1.转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达.结果 成功从红花中克隆1个MYB基因,命名为CtMYB1,GenBank登录号为KJ524853.CtMYB1基因全长893 bp,ORF为750 bp,编码249个氨基酸.同时,成功构建了该基因的原核表达载体.SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约30 000,与预测的蛋白相对分子质量一致.结论 成功克隆了CtMYB1基因,构建了原核表达载体,初步证明该基因在大肠杆菌中成功表达.
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关键词
红花MYBCtMYB1原核表达红花黄色素RT-PCRRACECarthamus tinctorius L.MYBCtMYB1prokaryotic expressionsafflor yellowRT-PCRRACE
分类号
R282.12
栏目名称
药材与资源
DOI
10.7501/j.issn.0253-2670.2015.17.017
发布时间
2015-11-19
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