交联纳米SiO2固定化蜗牛酶的制备表征及转化淫羊藿苷研究

Study on preparation, characterization, and transformation of icariin of immobilized snailase on nano-SiO2

摘要目的制备交联纳米SiO2固定化蜗牛酶,并对其理化性质、酶解淫羊藿苷为宝藿苷Ⅰ的最适酶解条件及酶学性能进行考察.方法采用共价偶联法将蜗牛酶固定在戊二醛交联纳米SiO2上,以相对酶活力为指标,对固定化条件进行优化;采用透射电镜(TEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)和元素分析法对固定化蜗牛酶的理化性质进行表征;并以淫羊藿苷为底物,以游离酶为对照,考察固定化蜗牛酶的最适酶解条件及酶解动力学参数、重复利用性、热稳定性等酶学性能.结果固定化蜗牛酶制备的最佳酶载比为1:3,固定化时间为6h;其转化淫羊藿苷的最适酶解条件为pH 5.0,转化温度60℃,酶与底物质量比1:2,转化时间12 h.固定化蜗牛酶的酶解动力学参数最大反应速率(Vmax)为0.43 μg/min,米氏常数(Km)为0.78 mmol/L,重复使用5次后的相对酶活仍能保持在70％以上.结论制备的交联纳米SiO2固定化蜗牛酶机械强度高、稳定性好,不但可重复使用,还可定向水解淫羊藿苷为活性更强的宝藿苷Ⅰ,工艺简单易行,转化效率高,适宜于工业化生产.

作者 李瑞云 ^[1] 刘聪燕 ^[2] 许婷 ^[2] 杨茹 ^[2] 陈彦 ^[2] 学术成果认领

作者单位 安徽中医药大学,安徽合肥230012;南京中医药大学附属中西医结合医院,江苏南京210028;江苏省中医药研究院,中药组分与微生态研究中心,江苏南京210028 ^[1] 南京中医药大学附属中西医结合医院,江苏南京210028;江苏省中医药研究院,中药组分与微生态研究中心,江苏南京210028 ^[2]

关键词固定化蜗牛酶交联纳米SiO2 生物转化淫羊藿苷宝藿苷Ⅰ

主题词研究(Research)生物转化(Biotransformation)性(Sex)动力学(Kinetics)时间(Time)

分类号 R283.6

栏目名称 药剂与工艺

DOI 10.7501/j.issn.0253-2670.2019.20.010

发布时间 2019-12-13

基金项目

国家自然科学基金青年基金项目 江苏省科教强卫医学重点人才项目