藏药兔耳草常用基原的ITS2序列鉴定研究

Identification of commonly used origins of Tibetan medicine Lagotidis Herba based on ITS2 barcode and market analysis

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摘要目的利用DNA条形码内转录间隔区2(internal transcribed spacer2,ITS2)序列针对自采及流通使用环节的不同基原兔耳草进行分析,建立一种快速鉴定常用兔耳草的方法,并分析市场流通的主流品种.方法采用试剂盒提取101份兔耳草样品的DNA,针对其ITS2片段进行PCR扩增并双向测序,获取ITS2序列信息;并从GenBank上下载相关序列28条.运用MEGA6.0对129条ITS2序列进行比对分析,计算种内和种间K2P遗传距离,构建邻接法(neighborjoining,NJ)系统进化树,并预测ITS2二级结构.采用BLAST法及NJ聚类分析法分析市场流通兔耳草基原.结果除四川部分区域所产全缘兔耳草Lagotis integra与革叶兔耳草L.alutacea种间亲缘关系近外,短筒兔耳草L.brevituba、全缘兔耳草、圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草、短穗兔耳草L.brachystachya及紫叶兔耳草L.praecox的种内最大遗传距离均小于种间最小遗传距离,具有明显的条形码间距.系统进化树显示短筒兔耳草、圆穗兔耳草、短穗兔耳草及紫叶兔耳草单独聚为一支,四川部分区域所产全缘兔耳草与革叶兔耳草聚为一支,其余全缘兔耳草聚为一支.通过ITS2二级结构发现,各基原兔耳草在茎环数目、大小及位置均有一定差异,可区分亲缘关系近的全缘兔耳草与革叶兔耳草.市场分析显示,市面上流通的兔耳草有6种基原,以全缘兔耳草使用占比最高,短筒兔耳草次之,短穗兔耳草及圆穗兔耳草较低,紫叶兔耳草及革叶兔耳草最低.结论 ITS2序列可以作为DNA条形码用来鉴别常用藏药兔耳草的基原,市场主流兔耳草品种为全缘兔耳草、短筒兔耳草及短穗兔耳草.

作者高必兴 ^[1] 齐景梁 ^[2] 钟红 ^[3] 马璐琳 ^[3] 李倩 ^[2] 连艳 ^[4] 蒋桂华 ^[4] 蒋运斌 ^[5] 学术成果认领

作者单位成都中医药大学药学院,四川成都 611137;四川省药品检验研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室,四川成都 611731 ^[1] 四川省药品检验研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室,四川成都 611731 ^[2] 成都市郫都区中医医院,四川成都 611730 ^[3] 成都中医药大学药学院,四川成都 611137 ^[4] 西南大学药学院/中医药学院,重庆北碚 400715 ^[5]

关键词兔耳草 ITS2序列短筒兔耳草全缘兔耳草圆穗兔耳草革叶兔耳草短穗兔耳草紫叶兔耳草主流品种

分类号 R286.12

栏目名称 药材与资源

DOI 10.7501/j.issn.0253-2670.2022.21.024

发布时间 2023-02-08

基金项目

国家食药监总局药化司专项 四川省药品监督管理局科技计划项目 国家自然科学基金 四川省科技厅应用基础计划课题 四川省中医药管理局项目 四川省民族药标准提升项目