僵蚕提取液激活凝血因子Ⅻ介导缺血再灌注大鼠血管新生研究

Bombyx Batryticatus extracts activates coagulation factor Ⅻ to promote angiogenesis in rats with ischemia/reperfusion

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摘要目的基于接触系统探讨僵蚕提取液激活凝血因子Ⅻ(coagulation factor Ⅻ,FⅫ)对缺血性脑卒中大鼠血管新生的干预作用.方法检测僵蚕提取液干预血浆凝血四项,体外检测僵蚕提取液对FⅫ及其下游底物激肽释放酶(kallikrein-kinin,KK)的激活作用.通过大鼠脑缺血再灌注损伤模型,检测大鼠的脑形态学及FⅫ、KK、血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factors,VEGF)、CD31、Brdu+/vWF+蛋白表达;通过氧糖剥夺模型,检测大鼠脑微血管内皮细胞的形态学改变、细胞增殖情况及VEGF的表达.采用LC-MS鉴定僵蚕提取液药效物质.结果在体外实验中,僵蚕提取液延长了人血浆部分凝血酶原时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)(P＜0.05),激活FⅫ并导致下游底物KK的生成,呈剂量相关性(P＜0.05);在大鼠脑缺血再灌注模型中,僵蚕提取液改善了大鼠神经元损伤,激活了 FⅫ,导致KK生成和VEGF、CD31、Brdu+/vWF+的表达增加(P＜0.05、0.01);在细胞氧糖剥夺实验中,僵蚕提取液干预提高了大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和VEGF的表达(P＜0.05).LC-MS鉴定僵蚕提取液含代谢物共计809个.结论僵蚕提取液可改善缺血再灌注大鼠神经功能损伤,其机制可能与抗凝和促脑微血管内皮细胞增殖有关.