基于UPLC-Q-TOF-MS/MS结合特征分子网络技术的畲药树参成分分析及其抗炎活性评价
Component analysis and anti-inflammatory activity evaluation of Dendropanax dentiger from a She ethnic medicine based on UPLC-Q-TOF-MS/MS combined with characteristic molecular network technology
摘要目的 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)结合特征分子网络(feature-based molecular networking,FBMN)技术,对畲药树参Dendropanax dentiger醇提物化学成分进行快速鉴定,并对其抗炎活性进行初步评价.方法 ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm);以 0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,在正、负离子模式下采集质谱数据,并在全球天然产物社会分子网络(global natural products social molecular networking,GNPS)网站(http://gnps.ucsd.edu)上构建FBMN.基于SIRIUS 6.2.2 软件及GNPS数据库匹配结果,结合对照品比对、保留时间、特征碎片、文献及PubChem、MassBank 数据库信息,并结合 FBMN 的结构聚类特性,快速鉴定树参醇提物的化学成分并总结其裂解规律;采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7 巨噬细胞炎症模型,结合CCK-8、Western blotting及免疫荧光实验,评价其抗炎效果.结果 共鉴定出树参中 59 种化学成分,包括酚酸类 18 个、木脂素类 11 个、黄酮及其苷类 8 个、香豆素 6 个、环肽 4 个、苯乙醇苷 3 个、脂肪酸及其衍生物 4 个、环烯醚萜 2 个、糖苷 2 个及生物碱 1 个.其中,19 个潜在未报道化合物首次从树参中分析得到.基于FBMN,成功识别异绿原酸A、B、C等同分异构体,并进一步推测出其甲基化衍生物.细胞实验结果表明,树参醇提物可显著抑制 LPS 诱导的炎症反应,降低白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达,促进白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)分泌,并抑制核因子-κB亚基p65(nuclear factor-kappa-B p65,NF-κB p65)的核转位.结论 FBMN弥补了传统分子网络在鉴定同分异构体方面的不足,UPLC-Q-TOF-MS/MS联合FBMN技术可实现树参复杂成分的快速、高效鉴定,并首次发现 19 个潜在未报道化合物.树参提取物具有良好抗炎活性,为其后续药效物质研究和开发应用提供实验依据.
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