摘要目的 建立免疫磁分离-酶联免疫分析(immunomagnetic separation-enzyme-linked immunoassay,IMS-ELISA)法测定5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF),并用于炼蜜工艺参数优化.方法 将抗5-HMF抗体修饰在磁珠表面,以实现对5-HMF的特异捕获与分离富集.采用生物素化5-HMF-BSA偶联物(BSA为牛血清白蛋白)作为竞争配体,配合辣根过氧化物酶-链霉亲和素(HRP-SA),以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)为底物进行比色显色.通过磁分离实现5-HMF的富集,有效去除基质干扰并提高检测灵敏度.并开展线性关系考察、检出限、专属性、精密度与准确度等方法学验证.随后开展近线检测应用:选取中药蜜丸制剂炼蜜过程中的关键影响因素(温度、压力、时间、储存时长与复热温度),以IMS-ELISA检测5-HMF含量.结果 建立的IMS-ELISA方法在0.4～160.0ng/mL内线性良好(R2=0.997 3),检出限0.4 ng/mL;对糠醛及5-HMF无明显交叉反应;批内RSD为4.29％;实际样品含量检测结果与HPLC法无显著性差异(P＞0.05).在IMS-ELISA的应用中,成功对5-HMF含量进行了监测,且适用性良好.试验结果表明,推荐75～85 ℃、20.0kPa、10～15 min作为炼蜜的参考参数;储存时长≥48h及复热温度≥80 ℃均促进5-HMF生成.结论 基于IMS-ELISA的5-HMF检测方法具有高灵敏、强专属性和低成本的特点,可用于现代中药蜜丸制剂炼蜜、合坨等生产单元中的5-HMF近线监测,为中药蜜丸制剂的工艺优化提供方法学依据.