换一批
换一批靶向治疗肺癌双自杀基因HSV-TK/CD真核表达载体的构建
Construction of eukaryofic expression vector containing HSV/TK double suicide genes for targeted therapy of lung cancer
摘要背景与目的:本研究构建CEA启动子和CMV增强子调控表达的HSV-TK和CD基因双顺反子真核表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.方法:根据特异性引物PCR扩增获得CEA启动子(pCEA),巨细胞病毒的早期基因增强子(CMVE)序列,用基因重组的方法替换载体PIRES-EGFP通用启动子pCMV,得到重组质粒CMVE-PCEA-IRES-EGFP,转染重组质粒到表达CEA的肺癌细胞株中进行绿色荧光蛋白检测,确定启动子能有效启动报告基因在CEA阳性的肺癌细胞中的表达.用PCR扩增得到目的基因HSV-TK和CD,将目的基因HSV-TK和CD亚克隆到载体CMVE-pCEA-IRES-EGFP上,得到自杀基因HSV-TK/CD双表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.结果:经酶切、PCR及DNA测序鉴定,双自杀基因真核表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD已成功构建,嵌合启动子CMVE-pCEA调控下能启动下游报告基因在CEA阳性的肺癌细胞株的表达.结论:成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA启动的双自杀基因HSV-TK/CD真核表达载体,为下一步研究双自杀基因对于CEA阳性表达的肺癌的治疗奠定了基础.
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