换一批
换一批巨噬细胞移动抑制因子基因的克隆和原核表达
Molecular cloning and procaryotic expression of macrophage migration inhibitory factor gene
摘要目的:扩增、克隆人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组MIF蛋白.方法:根据人MIF基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术从人T淋巴细胞mRNA中扩增MIF基因.将MIF定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,并将构建正确的重组表达载体pGEX-4T-MIF转化工程菌BL21(DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖(IPTG)诱导表达重组MIF蛋白.用GSTrap亲合柱纯化表达产物GST-MIF,行柱上凝血酶消化,洗脱获得MIF蛋白.用巨噬细胞移动抑制试验(MMI)鉴定MIF蛋白的生物活性.结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果表明,成功构建了重组质粒pGEX-4T-MIF,人MIF cDNA长348 bp,编码115个氨基酸.经IPTG诱导,高效表达出可溶的GST-MIF蛋白.SDS-PAGE和Western blotting分析显示,GST-MIF经凝血酶消化,获得13 kU的MIF蛋白.MIF蛋白对巨噬细胞移动的抑制率达30%,具有生物活性.结论:克隆、测定了人MIF基因,在大肠杆菌表达出具有生物活性的MIF蛋白.
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主题词
基因(Genes)巨噬细胞(Macrophages)移动(Locomotion)蛋白(Egg White)巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage Migration-Inhibitory Factors)
分类号
R363
栏目名称
短篇论著
DOI
10.3321/j.issn:1000-4718.2005.04.044
发布时间
2005-05-19
基金项目
广东省自然科学基金
广东省自然科学基金
广东省卫生厅科研项目
广东省人民医院科研项目
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