换一批
换一批应用重组PCR技术构建人单核细胞趋化蛋白- 1cDNA的突变体-hμMCP-1(7ND)
Construction of human monocyte - chemoattractant protein - 1 mutant - 7 ND by recombinant PCR
摘要目的:探讨用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白-1(hμMCP-1)基因cDNA进行缺失突变,构建N末端缺失7个氨基酸的编码序列hμMCP-1突变体-hμMCP-1(7ND)cDNA,以期实现7ND基因治疗抑制MCP-1活性.方法:根据缺失前后的两段基因片段A和B分别设计两对引物即内引物与外引物,第一轮PCR反应通过每段各自的内外引物,分别获得加有互补末端的A+和B+DNA片段.然后进行第二轮PCR反应,以第一轮PCR产物为模板,加入两外引物,获得大量重组体AB基因片段,将PCR产物与T载体连接,进行酶切鉴定并测序证实成功进行了hμMCP-1的基因改造.为便于表达hμMCP-1突变体,通过EcoRⅠ/HindⅢ酶切,将目的基因克隆入pcDNA3.1真核表达载体中.结果:经酶切鉴定并测序,表明已成功地构建了hμMCP-1cDNA突变体-7ND的真核细胞表达载体.结论:已成功进行了hμMCP-1基因cDNA的缺失突变,获得了7ND cDNA的克隆,为进一步研究hμMCP-1功能奠定了基础.
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分类号
R363
栏目名称
论著
DOI
10.3321/j.issn:1000-4718.2005.12.039
发布时间
2006-03-02
基金项目
中国科学院资助项目
卫生部临床学科重点项目
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