换一批
换一批IGF-Ⅱ P3启动子调控融合基因质粒构建及在肝癌细胞中表达
Construction of the vector for fusion protein gene driven by IGF - Ⅱ P3 promoter and its expression in hepatocellular carcinoma cells
摘要目的:构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因(IGF-Ⅱ)P3启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶(tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,观察其在肝癌细胞系HepG2及宫颈癌细胞系HeLa细胞中的表达及其作用.方法:应用基因重组技术,构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动EGFP与tk融合表达穿梭质粒载体,脂质体转染技术将其转入HepG2及HeLa中,48 h后荧光显微镜下观察荧光表达,RT-PCR法检测tk和EGFP mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染融合蛋白载体后给予不同浓度的GCV对HepG2及HeLa细胞毒作用.结果:酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功;转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光;RT-PCR检测到tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达;GCV对转染了携此质粒载体的HepG2细胞有选择性细胞毒作用.结论:成功构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体,转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用,为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定了基础.
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关键词
胰岛素样生长因子Ⅱ绿色荧光蛋白癌,肝细胞基因疗法Insulin -like growth factor ⅡGreen fluorescent proteinCarcinoma,hepatocellularGene therapy
分类号
R363
栏目名称
论著
DOI
10.3321/j.issn:1000-4718.2007.08.007
发布时间
2007-10-12
基金项目
国家自然科学基金
广东省自然科学基金
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