单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响

Screening of highly efficient siRNA for silencing US12 gene of HSV-1

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摘要目的:筛选高效沉默单纯疱疹病毒1型(HSV-1) US12基因的siRNA,研究siRNA沉默US12基因后对HSV-1增殖的影响.方法:构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,设计并化学合成3对靶向US12基因的siRNA,与pEGFP-N1-US12融合表达质粒共转染Vero细胞,流式细胞术筛选高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对细胞内US12 mRNA表达水平的抑制效果,空斑减数实验评价siRNA对HSV-1增殖的抑制效果.结果:共转染实验筛选出高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNAS121、siRNAS122及siRNAS123.3对siRNA均能显著降低感染细胞US12 mRNA的表达水平,但空斑减数实验均未发现3对siRNA对HSV-1的增殖有显著抑制效果.结论:成功构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,筛选到高效抑制US12基因表达的3对siRNA,但是对病毒的体外增殖无显著影响,表明US12表达的立即早期蛋白ICP47的功能可能与HSV-1体外增殖无直接相关.

作者李深 ^[1] 任哲 ^[2] 王巧利 ^[1] 向阳飞 ^[1] 王一飞 ^[1] 胡巢凤 ^[3] 戚仁斌 ^[3] 陆大祥 ^[3] 张庶民 ^[4] 张佩琢 ^[5] 学术成果认领

作者单位暨南大学生物医药研究开发基地,广东,广州,510632 ^[1] 暨南大学生物医药研究开发基地,广东,广州,510632;暨南大学医学院病理生理学系,广东,广州,510632 ^[2] 暨南大学医学院病理生理学系,广东,广州,510632 ^[3] 中国药品生物制品检定所,北京,100050 ^[4] 上海吉玛制药技术有限公司,上海,201203 ^[5]

关键词 siRNA RNA干扰基因,US12 单纯疱疹病毒1型

主题词基因(Genes)疱疹病毒1型, 人(Herpesvirus 1, Human)病毒(Viruses)质粒(Plasmids)细胞(Cells)

分类号 R363

DOI 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.03.021

发布时间 2011-05-04

基金项目

国家863资助项目 国家自然科学基金联合资助项目 植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室自主课题 开放课题