换一批
换一批带有穿膜肽PTD的重组Oct4的制备及活性鉴定
Preparation and activity evaluation of recombinant Oct4 with penetrating peptide PTD
摘要目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4.方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至E.coli ER2566.镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定.用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(FRET)检测重组融合蛋白PTD-Oct4结合目的DNA的活性.结果:成功获得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功进入细胞,定位于细胞核内,穿膜效率为(28.3±2.4)%,并具有与目标DNA序列特异结合的能力.结论:制备重组PTD-Oct4为外源蛋白诱导多能干细胞(IPSCs)奠定基础.
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分类号
Q78
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1000-4718.2011.09.025
发布时间
2011-11-14
基金项目
国家自然科学基金资助项目
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