RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α转录后调控机制的初步研究

Regulation of IκB-α by RNA-binding protein HuR at post-transcriptional level

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摘要目的:探讨RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α(IκB-α)转录后调控机制.方法:构建IκB-αmRNA 3'UTR报告基因真核表达质粒,并转染3T3细胞；体外生物素标记IκB-α mRNA 3'UTR并进行RNA pull-down；过表达及干扰HuR后,qPCR检测其对IκB-αmRNA稳定性的影响,Western bltting检测其对IκB-α蛋白表达的影响.结果:(1) IκB-α mRNA 3'UTR报告基因真核表达质粒构建成功；(2)报告基因检测:共转染pcDNA3-HA-HuR质粒及IκB-α mRNA 3'UTR报告基因质粒后与对照组相比其数值明显增高；(3)用生物素标记的IκB-α mRNA3'UTR探针进行RNA pull-down,可以检测到特异性结合的HuR蛋白；(4)过表达HuR,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显上调；干扰HuR表达后,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显下调.结论:(1) HuR可以与IκB-α mRNA 3'UTR特异性结合并参与调节IκB-α mRNA 3'UTR的功能；(2) HuR对IκB-α mRNA稳定性无明显影响,其主要调控IκB-α蛋白表达,使其表达上调.

作者于文燕 ^[1] 马小娟 ^[1] 孙宏卫 ^[2] 买买提祖农·买苏尔 ^[1] 马瑞斌 ^[3] 柯颖 ^[4] 刘玉新 ^[5] 马琪 ^[6] 学术成果认领

作者单位新疆医科大学病理生理学教研室,新疆乌鲁木齐,830000 ^[1] 南方医科大学病理生理学教研室,广东广州,510515 ^[2] 武警新疆总队医院普外科,新疆乌鲁木齐,830000 ^[3] 武警新疆总队医院神经外科,新疆乌鲁木齐,830000 ^[4] 宁波大学医学院组织学教研室,浙江宁波,315000 ^[5] 新疆医科大学机能中心,新疆乌鲁木齐,830000 ^[6]

关键词 HuR蛋白 NF-κB抑制因子α 转录后调控

主题词蛋白(Egg White)研究(Research)基因, 报告(Genes, Reporter)质粒(Plasmids)性(Sex)

分类号 R363.2

栏目名称论著

DOI 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.04.020

发布时间 2013-06-03

基金项目

国家自然科学基金资助项目 浙江省杰出青年科学基金资助项目 宁波市创新团队项目