换一批
换一批乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响
Construction of hepatitis B virus X protein truncated mutants and their effects on β-catenin/TCF4 transcriptional activity in Wnt signaling pathway
摘要目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响.方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49～154aa、C端85～154 aa、N端1～57 aa+C端141～154 aa、N端1～57 aa或N端1～84 aa截短突变体的表达载体;激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位;采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响.结果:(1)成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体.(2)野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位,其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质;C端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布;N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx,主要定位于胞质,呈不均一的粗大颗粒,胞核中也有少量表达.(3)与野生型HBx相比,HBx C端49 ～154 aa、C端85～154 aa、N端1～57 aa+C端141～154aa、N端1～57 aa和N端1～84 aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降,分别下降了78.7％、84.7％、75.7％、93.8％和95.5％.结论:HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同,提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用.
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关键词
乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体细胞内定位转录活性Hepatitis B virus X proteinTruncated mutantsIntracellular locationTranscriptional activity
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-4718.2014.01.006
发布时间
2014-03-13
基金项目
国家自然科学基金资助项目（31171307,81371827）；
“十二五”传染病国家科技重大专项（2012ZX10002005-003-002, 2013ZX10002002-005-003）
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