连续传代培养对 hUC-MSCs 上NLR 家族 mRNA 表达的影响

Effect of continuous subculturing of hUC-MSCs on mRNA expression of NLR family

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摘要目的：探讨连续传代培养对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）表达NOD样受体（NLR）家族所有23个成员mRNA的影响，为改进hUC-MSCs传代培养质量与增加hUC-MSCs在实验和临床应用中的数量及安全性寻找切入途径。方法：取剖宫产无菌新生儿脐带，经胶原酶II消化结合贴壁选择分离纯化hUC-MSCs，并连续传代培养；采用流式细胞术、诱导分化和RT-qPCR对连续培养传代前后的hUC-MSCs（第3和28代）进行鉴定并对23个NLR家族成员mRNA的表达进行定量分析。结果：连续传代培养前后hUC-MSCs的细胞表型均为CD29＋／CD44＋／CD105＋／CD31-／CD34-／CD40-／CD45-／CD106-／HLA-DR-，能被诱导为成骨和脂肪细胞，符合国际细胞治疗协会建议的MSCs基本特征。全部NLR家族成员的mRNA在培养第3代hUC-MSCs上均有表达，且NOD1、NLRC4、NL-RC5、NLRP1、NLRP3、NLRP10、NAIP、NLRX1和APAF1高表达，其余成员低表达。培养传代至第28代除NLRP10的mRNA表达上升、NLRC5和NLRX1 mRNA表达基本不变外，其余成员的mRNA表达均有所下降，其中NLRP1 mR-NA表达差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：体外连续传代培养对hUC-MSCs表达NLR家族成员的影响是多向性的。这些影响与MSCs的增殖、分化及其免疫调节功能的联系有待进一步实验探讨。