外源性 ATP 诱导 PC12细胞的膜孔形成

Exogenous ATP induces formation of membrane pore in PC12 cells

二维码有效期 120s

摘要目的：探讨外源性三磷酸腺苷（ ATP）诱导PC12细胞的膜孔形成及关键分子靶标。方法：用不同浓度的ATP处理培养的PC12细胞，采用倒置相差显微镜观察形态，CCK-8法检测细胞存活率，YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性，Western blotting和real-time PCR检测P2X7受体和pannexin 1（Panx1）表达的变化。结果：（1）ATP（1 mmol/L、3 mmol/L、5 mmol/L）作用3 h，可见随着ATP浓度升高，PC12细胞变圆，脱壁细胞增多；当ATP浓度为3 mmol/L或5 mmol/L时，PC12细胞活力较对照组显著下降（P＜0．05）。（2）不同浓度的ATP（0、1、3、5 mmol/L）作用1 h，PC12细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度随着浓度增加而增加；同一浓度的ATP作用不同时间（15、30、60 min），随着时间的增加，胞内的荧光强度也增加。（3）亮蓝G（P2X7受体的抑制剂）预处理可明显拮抗ATP引起的细胞活力下降和胞内荧光强度增强（P＜0．05），而生胃酮（Panx1的抑制剂）预处理不改变细胞活力和胞内的荧光强度（P＞0．05）。（4）ATP作用3 h使PC12细胞 P2X7受体的mRNA和蛋白表达明显升高（P＜0．05），而Panx1 mRNA和蛋白表达变化不大（P＞0．05）。结论：胞外高浓度ATP引起PC12细胞的膜孔形成可能主要与P2X7受体的表达和激活有关。