换一批
换一批重组蛋白 PTD-HSP27的制备及其穿细胞膜和角膜组织的功能研究
Preparation of recombinant PTD-HSP27 and verification of its ability to penetrate the cell membrane of human lens epithelial cells and rabbit cor-nea
摘要目的：制备PTD-HSP27蛋白并研究其能否穿过人晶状体上皮细胞SRA01／04细胞膜及新西兰大白兔的角膜组织进入眼前房。方法：利用重叠延伸PCR法获得重组目的基因片段PTD-HSPB1-6His，构建重组质粒pKYB-PTD-HSP27-6His，原核诱导PTD-HSP27蛋白表达及纯化重组蛋白后对其进行Western blotting鉴定；用异硫氰酸荧光素（ FITC）标记重组蛋白PTD-HSP27并检测其穿透SRA01／04细胞膜的能力及兔眼角膜组织的能力。结果：成功构建并纯化制备目的蛋白PTD-HSP27，在PTD-HSP27孵育后的SRA01／04细胞及结膜囊滴注PTD-HSP27兔眼前房内均可检测出重组蛋白PTD-HSP27。结论：通过重叠延伸PCR法及镍柱层析纯化法可以获得较纯的重组蛋白PTD-HSP27；重组蛋白PTD-HSP27能够穿透SRA01／04细胞膜及穿越兔眼角膜进入房水。
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关键词
蛋白转导域热休克蛋白27反式转录激活因子晶状体上皮细胞KEY WORDS] Protein transduction domainHeat shock protein 27Trans-activators of transcriptionLens epi-thelial cells
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1000-4718.2015.01.026
发布时间
2015-02-10
基金项目
国家重点基础研究发展计划(973计划)( No．2011CB707501)
广东省自然科学基金资助项目
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