换一批磷酸化蛋白质组学鉴定 PTPLAD1调控的结肠癌细胞酪氨酸磷酸化蛋白质
Phosphoproteomics to analyze PTPLAD1-regulated tyrosine-phosphoryla-ted proteins in colon cancer cells
摘要目的：用磷酸化蛋白质组学的方法鉴定并分析结肠癌细胞中含蛋白酪氨酸磷酸酶样A结构域蛋白1（ PTPLAD1）调控的酪氨酸磷酸化蛋白。方法：运用siRNA技术沉默PTPLAD1的表达，于细胞培养条件下运用氨基酸稳定同位素标记技术（ stable lsotope labeling with amino acids in cell culture， SILAC）标记细胞，用酪氨酸磷酸化抗体免疫沉淀富集酪氨酸磷酸化蛋白，用LTQ-OrbitrapXL质谱鉴定因敲低PTPLAD1所出现的差异表达的酪氨酸磷酸化蛋白，进一步利用Ingenuity Pathway Analysis （ IPA）软件对这些差异蛋白进行生物信息学分析。结果：用real-time PCR筛选得到有效的siRNA干扰片段，Western blot验证其干扰效果及有效干扰时间。质谱鉴定PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白共20个，其中显著上调的8个，显著下调的10个，主要为转录因子及肿瘤标志物相关蛋白。 IPA软件的结果表明PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白的功能主要与器官发育分化、维持组织分化类型及细胞凋亡、增殖相关。结论：成功鉴定出PTPLAD1调控的差异酪氨酸磷酸化蛋白，可以为后续研究PTP-LAD1在结肠癌的发生发展中的作用及机理提供基础。
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关键词
含蛋白酪氨酸磷酸酶样A结构域蛋白1HCT-116细胞小干扰RNA氨基酸稳定同位素标记技术磷酸化蛋白质组学Protein tyrosine phosphatase-like A domain containing protein 1HCT-116 cellsSmall inter-fering RNAStable isotope labeling with amino acidPhosphoproteomics
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-4718.2015.05.014
发布时间
2015-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2011CB910700）
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