NVP-BEZ235诱导多囊肾大鼠胆管上皮细胞自噬的机制研究

NVP-BEZ235 induces autophagy of polycystic kidney rat cholangiocytes

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摘要目的:探讨PI3 K/Akt/mTOR双靶点抑制剂NVP-BEZ235诱导多囊肾(polycystic kidney,PCK)大鼠胆管上皮细胞自噬的作用.方法:免疫组化法检测p-mTOR和p-Akt在PCK大鼠胆管上皮细胞中的水平.WST-1比色法检测NVP-BEZ235对胆管细胞活力的抑制作用以及LC3、Beclin 1基因沉默和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对细胞活力的影响.蛋白免疫印迹法检测NVP-BEZ235对PI3 K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白及自噬标志蛋白LC3和Beclin 1的变化.结果:p-mTOR和p-Akt在PCK大鼠胆管上皮细胞中显著升高,NVP-BEZ235可明显抑制胆管上皮细胞的活力,且呈浓度和时间依赖性改变(P＜0.05);NVP-BEZ235明显抑制PI3 K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的水平;并上调自噬标志蛋白LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值和Beclin 1蛋白的表达水平.LC3、Beclin 1基因沉默和3-MA均可明显减弱NVP-BEZ235对细胞活力的抑制作用(P＜0.01).结论:NVP-BEZ235可抑制PCK大鼠胆管上皮细胞的活力,其机制与自噬密切相关.