多柔比星通过Stat3-Oct-4/CD44途径诱导三阴性乳腺癌4T1细胞干性的产生

Doxorubicin induces stemness of mouse TNBC 4T1 cells through Stat3-Oct-4/CD44 signaling pathway

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摘要目的:观察多柔比星对三阴性乳腺癌细胞干性的诱导作用并研究其作用机制.方法:用不同终浓度 (0、0.05、0.1和0.5μmol/L) 多柔比星培养细胞, 观察细胞形态及存活情况, 筛选出最适多柔比星浓度 (0.1μmol/L) 用于后续实验.小鼠乳腺癌4T1细胞和人乳腺癌MDA-MB-468细胞经多柔比星 (0.1μmol/L) 持续刺激4周后分别命名为4T1-DOX和MDA-MB-468-DOX细胞.通过成球实验观察细胞的干性, 免疫荧光检测CD133的表达, 流式细胞术检测CD44的表达, Western blot检测Stat3、p-Stat3和Oct-4的表达.结果:成球实验发现4T1-DOX细胞成球能力较4T1细胞显著增强, MDA-MB-468-DOX细胞成球能力较MDA-MB-468细胞也显著增强 (P <0.05) ;免疫荧光结果显示CD133在4T1-DOX细胞的表达比4T1细胞明显增高 (P <0.05) ;流式细胞术结果表明CD44在4T1-DOX中表达较4T1细胞显著增高 (P <0.05) ;Western blot结果显示Oct-4及p-Stat3在4T1-DOX细胞中的蛋白水平增高 (P <0.05) , 而总Stat3的表达量未见显著改变.以上结果表明在0.1μmol/L多柔比星持续诱导下4T1细胞干性特征明显增强.加入Stat3抑制剂WP1066后, CD44、Oct-4和p-Stat3的蛋白水平均下降 (P <0.05) .结论:多柔比星通过激活Stat3-Oct-4信号通路, 使三阴性乳腺癌细胞成球能力增强, 4T1细胞干性标志物CD133及CD44表达增多, 诱导乳腺癌细胞干性的产生.因此, Stat3-Oct-4通路可能成为三阴性乳腺癌治疗的新靶标.

作者钟瑾怡 ^[1] 成丛丛 ^[2] 徐金媛 ^[1] 李雪松 ^[1] 张升 ^[1] 张宝刚 ^[3] 王丽华 ^[2] 史立宏 ^[4] 学术成果认领

作者单位潍坊医学院药学院,山东潍坊,261053 ^[1] 潍坊医学院附属医院分子肿瘤学实验室,山东潍坊,261053 ^[2] 潍坊医学院病理学教研室,山东潍坊,261053 ^[3] 潍坊医学院药学院,山东潍坊 261053;潍坊医学院山东省应用药理学重点实验室,山东潍坊 261053 ^[4]

关键词多柔比星三阴性乳腺癌肿瘤干细胞 Stat3/Oct-4信号通路 Doxorubicin Triple-negative breast cancer Cancer stem cells Stat3/Oct-4 signaling pathway

主题词细胞(Cells)多柔比星(Doxorubicin)三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Neoplasms)肿瘤干细胞(Neoplastic Stem Cells)观察(Observation)

分类号 R737.9 R363.2

栏目名称

短篇论著

DOI 10.3969/j.issn.1000-4718.2019.02.027

发布时间 2019-05-31

基金项目

国家自然科学基金资助项目（81672631,81472489）；山东省自然科学基金资助项目（ZR2015HL119,ZR2011HL047）