摘要目的:在体内外实验中探讨E3泛素-蛋白连接酶ITCH通过硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对阿尔茨海默病(AD)样病变的调控作用.方法:(1)随机分组选取2、4、6月龄的5×FAD小鼠(AD模型)和野生型(WT)小鼠各15只,采用硫磺素和免疫荧光染色法检测脑内β-样淀粉蛋白(Aβ)斑块数量,其中免疫荧光染色法进一步用于分析TXNIP蛋白表达水平,Western blot检测泛素连接酶ITCH和TXNIP蛋白水平变化并用免疫共沉淀法分析二者的相互作用.(2)使用脂多糖(LPS)刺激小鼠小胶质细胞BV2构造神经炎症模型,将其分为对照(CON)组和LPS+ATP处理组,选用Aβ刺激的BV2细胞构造AD炎症模型,根据处理时间的不同,将其分为CON组、12 h处理组、24 h处理组和48 h处理组,采用Western blot检测ITCH、TXNIP和NLRP3炎症小体关键组分NLRP3和caspase-1及其下游分子白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平;在Aβ刺激的BV2细胞模型中选用腺病毒转染过表达ITCH(OE-ITCH),实验分为阴性对照组、Aβ寡聚体刺激组和OE-ITCH组,Western blot检测上述炎症相关蛋白的表达水平.结果:5×FAD转基因小鼠皮层及海马区Aβ斑块沉积随月龄增长呈依赖性上升趋势(P<0.01),且与WT小鼠相比,其TXNIP蛋白表达水平同步升高,泛素连接酶ITCH表达水平显著下调(P<0.05).免疫共沉淀结果证实,2月龄和4月龄5×FAD小鼠脑内ITCH与TXNIP蛋白存在相互作用,但在4月龄时ITCH与TXNIP蛋白间相互作用显著减少.细胞实验结果显示,Aβ/LPS刺激后的BV2小胶质细胞中ITCH蛋白表达水平显著减少,同时伴随TXNIP、NLRP3炎症小体关键组分(NLRP3和caspase-1)及其下游分子IL-1β的表达同步上调(P<0.05);过表达ITCH显著抑制了Aβ刺激后BV2细胞TXNIP和NLRP3的异常激活和相关炎症因子的表达.结论:体内外实验结果均显示ITCH蛋白可通过抑制TXNIP-NLRP3信号通路相关蛋白的表达而在AD模型中发挥抗AD样病变的作用.