摘要目的:为了给RAD6参与的泛素化修饰相关领域的研究提供参考,在大肠杆菌中原核细胞表达GST-RAD6重组蛋白并通过免疫家兔制备其多克隆抗体。方法以cDNA文库作为模板,构建重组载体pET41a-GST-RAD6,转化至大肠杆菌表达菌株BL21中,诱导表达并纯化GST-RAD6融合蛋白,免疫家兔后制备其多克隆抗体,通过Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定其特异性及效价。结果成功构建了pET41a-GST-RAD6重组载体,得到了高纯度的重组蛋白,Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定显示获得的血清抗体效价高,特异性强。结论成功制备的高效价兔抗人RAD6血清抗体可为RAD6调控的泛素化修饰相关领域的研究奠定基础。
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