沉默SETDB1对肾癌细胞生长的影响及分子机制研究

The effect of SETDB1 silence on growth of human renal carcinoma cells and its molecular mechanism

摘要目的探讨组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型1(SETDB1)对人肾癌细胞增殖、凋亡的影响.方法体外培养肾癌ACHN细胞及正常肾小管上皮HK-2细胞,qRT-PCR及Western blot分别检测两种细胞系中SETDB1 mRNA及蛋白的表达.采用转染SETDB1特异性干扰性小核糖核酸(siRNA)敲低ACHN细胞中SETDB1表达,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测SETDB1的敲低效果,CCK-8法、溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)结合试验检测细胞活力与增殖,流式细胞仪、easpase3/7活性分析检测细胞凋亡的变化.采用qRT-PCR、Western blot检测沉默SETDB1后p53 mRNA及蛋白的表达水平.结果 SETDB1在肾癌ACHN细胞中表达水平明显高于正常肾小管上皮HK-2细胞(t=14.435,P＜0.01);转染SETDB1特异性siRNA沉默SETDB1表达后,ACHN细胞中SETDB1 mRNA(t=13.091,P＜0.01)及其蛋白表达水平明显降低;ACHN细胞活力显著降低(P＜0.05);细胞内DNA复制活性明显降低(P＜0.01);细胞凋亡率增加(f=6.765,P＜0.01);Csapase3/7酶活性提高(t=5.763,P＜0.01);同时p53 mRNA(t =9.241,P＜0.01)及蛋白的表达水平显著提高.结论 SETDB1在肾癌细胞中表达升高,下调SETDB1能够通过促进p53表达而发挥抗肿瘤生长作用.