三阴性乳腺癌人类白细胞抗原-G抑制T细胞免疫功能机制的研究

Mechanism of human leukocyte antigen-G inhibiting T cell immune function in triple-negative breast cancer

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摘要目的研究三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中人类白细胞抗原-G(HLA-G)表达与T细胞活化发挥免疫抑制功能的机制.方法在三组乳腺癌细胞系(MDA-MB-231,HCC1937,MDA-MB-468)中,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、Western blot检测并筛选出HLA-G高表达,纤维蛋白原样蛋白1(FGL1)、程序性死亡因子配体1(PD-L1)、唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15(SIGLEC15)低表达的乳腺癌细胞系为HCC1937;将HCC1937细胞分为NC组(对照组)与KD组(敲减组),进行RNA干扰(RNAi)慢病毒载体构建并转染KD组细胞以敲减HLA-G基因,且进行验证.HCC1937细胞分别进行HLA-G抗体封闭/未封闭处理,Jurkat细胞分别进行CD3、CD28激活/未激活处理,两种细胞共培养分为8组:NC--组、KD--组、NC+-组、KD+-组、NC-+组、KD-+组、NC++组和KD++组;细胞划痕实验、MTT法、ELISA法分别检测各组细胞迁移率、增殖率以及细胞上清液的干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2水平.结果 RT-qPCR提示HCC1937细胞HLA-G基因敲减成功;KD++组迁移率较NC++组显著增高(P＜0.05),但每对共培养组间细胞增殖率差异无统计学意义(P＞0.05);KD++组的IFN-γ浓度较NC++组、NC-+组显著降低(P＜0.05),但每对共培养组间IL-2浓度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TNBC细胞HLA-G可能促进活性T细胞分泌IFN-γ,HLA-G降低后IFN-γ抑制T细胞免疫功能,促进肿瘤转移.